CellPet 3D-iPSを用いて粒径が揃った脂肪由来ヒト間葉系間質細胞スフェロイドを作製しました。その後、平面培養へ移行しエクソソーム産生用培地に切り替えてエクソソーム分泌量を測定しました。平面培養だけで維持した群と比較して、スフェロイドを経由した群では、およそ1.3倍のエクソソームの分泌を確認できました。

CellPet 3D-iPSを用いてヒト間葉系間質細胞スフェロイドを作製し、培地を切り替えることで軟骨分化誘導を行いました。平面培養での軟骨分化誘導と比較して、ヒアルロン酸や弾性線維をより多く産生していました。また組織中に成熟軟骨組織の特徴である軟骨小腔を確認することができました。

CellPet 3D-iPSのディスポーザブルベッセルのガス透過性を評価しました。窒素バブリングを行い培地中の酸素、二酸化炭素を除去してから、各気体がどれくらいベッセルを透過して内部の培地に溶け込むか評価しました。その結果、およそ1時間程度で培養ディッシュ中の溶存酸素濃度と同程度となりました。

CellPet 3D-iPSを用いてヒト間葉系間質細胞のスフェロイド培養を行いました。培養ベッセルに播種して3日ごとに培地交換を行いました。6日目にスフェロイドを酵素で単分散化し、2等分して培養ベッセル2本に播種して培養を続けたところ、12日間の培養期間でおよそ8倍の増殖率を得ることができました。得られたスフェロイド直径分布は揃っており、また間葉系幹細胞としての性質が維持されていることを確認できました。

CellPet 3D-iPSを用いてiPS細胞のスフェロイド培養を行いました。培養4日後のスフェロイドの粒径分布を評価したところ、60%程度が直径200-300 umの大きさとなり、均一なiPSスフェロイドが形成されていました。CellPet 3D-iPSによる培養でも未分化マーカーの発現が維持されていることが分かりました。

CellPet 3D-iPS用に新開発したディスポーザブル培養ベッセルと従来のガラス培養ベッセルを用いてiPS細胞と骨肉腫細胞のスフェロイド培養を行いました。ディスポーザブルベッセルはガス透過性に優れていることから、スフェロイド培養中も溶存酸素濃度を高く保つことができていました。また、骨肉腫細胞ではディスポーザブルベッセルを使うことで、ガラスベッセルでは不可能だったスフェロイドを形成させることができました。

CellPet 3D-iPSを用いてiPS細胞の3次元回転浮遊培養を行いました。APEL2培地を用いたところ、三胚葉分化マーカーであるSox1、PDGFRα, Sox17の発現の増加が確認されました。このことから、APEL２培地とCellPet 3D-iPSを用いてスフェロイド培養することで、分化誘導を行えることが示唆されました。